CRISPR/Cas9 質粒-New

Santa Cruz 新品- CRISPR/Cas9 質粒-New

一 CRISPR/Cas9基因敲除質粒

1）每個Knockout 質粒產品設計為3個質粒，確保對特定基因識別和剪切效率達到zui大。每個質粒編碼*的20個核苷酸，序列來自GeCKO文庫。

2）Cas9/gRNA 復合體與靶DNA 的PAM（NGG）位點結合，并解旋DNA

gRNA與PAM位點附件的靶位點特異結合。

3）通過3個gRNA的向導，Cas9在3個特定位點對目的基因的5’外顯子進行剪切。

二、HDR 同源修復質粒

1）每個HDR產品包含了3種質粒，這三種質粒對相應的CRISPR/Cas9敲除質粒導致的缺口特異性修復。

2）HDR質粒為DSB提供特定的修復模板

3）每個HDR質粒包含兩個800堿基對同源臂，可特異的與相應的cas9誘導的雙鏈DNA破壞位點周圍的基因組DNA結合。

4）與敲除質粒共轉染時，HDR質粒的puro基因，用于篩選穩定的敲除克隆。

5）每個嘌呤霉素抗性基因兩側各有一個Loxp位點，便于Cre載體進一步處理。

三、雙切口酶質粒（Double Nickase Plasmids）

1）每個雙切口酶質粒由一對各自編碼 D10A突變型Cas9核酸酶和特異性20nt 組成，與CRISPR/Cas9敲除質粒相比，具有更高的特異性。

2）成對gRNA序列設計為大約5-20個堿基對的偏移，所形成的DNA雙切口被識別為功能性雙鏈斷裂。

3）每個casn/sgNA復合物在與向導RNA互補的DNA鏈僅產生一個切口。

4）使用成對的向導RNA可提高特異性且可zui低化脫靶效應。

四、CRISPR/dCas 激活質粒

1）用于激活內源基因的表達。包含三種質粒，幾個修飾組件形成協同激活介質（SAM）復合體，這個SAM復合體代表了迄今為止，zui有效的轉錄激活系統。